美國(guó)藥典委員會(huì)(USP)擁有200余年歷史的藥品標(biāo)準(zhǔn)制定經(jīng)驗(yàn)，在保證上市藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的同時(shí)，引領(lǐng)新型生物制品的研發(fā)與創(chuàng)新。通過(guò)召集新興技術(shù)領(lǐng)域的行業(yè)和科學(xué)專(zhuān)家，編纂最佳實(shí)驗(yàn)方案，在行業(yè)內(nèi)受到一致認(rèn)可。
病毒載體是目前用于DNA遞送的有效機(jī)制，可用于基因療法以及疫苗研發(fā)，為促進(jìn)該技術(shù)藥物的快速發(fā)展，達(dá)成質(zhì)量檢測(cè)共識(shí)，USP近期推出病毒載體疫苗質(zhì)量控制草案。文中提到采用賽分科技的體積排阻色譜柱SRT SEC-1000聯(lián)合使用MALS用于檢測(cè)總的病毒衣殼顆粒。
背景介紹
近年來(lái)，隨著新冠疫情的爆發(fā)，多個(gè)國(guó)家和機(jī)構(gòu)也開(kāi)發(fā)了基于病毒載體的新冠疫苗(如牛津-阿斯利康Vaxzevria，中國(guó)康希諾生物 Convidecia等)，在防止新冠疫情的擴(kuò)散中發(fā)揮了重要的作用。全球?qū)Υ祟?lèi)產(chǎn)品的需求在不斷提升，該類(lèi)產(chǎn)品的質(zhì)量控制急需完善。
病毒載體疫苗本身具有相對(duì)復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，可分為兩個(gè)部分對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行研究：其一，負(fù)責(zé)編碼激發(fā)免疫反應(yīng)相關(guān)蛋白質(zhì)的DNA；其二，則是病毒載體，而修飾的腺病毒應(yīng)用最為廣泛。每個(gè)組分的質(zhì)量屬性和潛在的雜質(zhì)需要分析，此外還需要評(píng)估成品的空殼率，因而制定合適的分析方法是保證質(zhì)量可靠的關(guān)鍵。
另一方面，病毒載體疫苗快速發(fā)展，并且成功應(yīng)用于疾病的預(yù)防，加速對(duì)其質(zhì)量控制的需求。如果沒(méi)有一套共同的方法來(lái)確定質(zhì)量，醫(yī)藥企業(yè)必須開(kāi)發(fā)他們自己的內(nèi)部方法，分散在產(chǎn)品創(chuàng)新上的注意力和資源，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不能達(dá)成共識(shí)。因而，美國(guó)藥典委員會(huì)搜集相關(guān)分析方法并發(fā)布此草案，推動(dòng)病毒載體疫苗產(chǎn)品發(fā)展。
文章概述
草案介紹了病毒疫苗載體的相關(guān)質(zhì)量檢測(cè)方法，分為鑒別（DNA序列、病毒衣殼）、效力（轉(zhuǎn)基因表達(dá)、病毒滴度）、含量（總病毒衣殼顆粒）、純度（載體聚體、空殼率、殘留宿主DNA）等幾個(gè)方面。針對(duì)不同的質(zhì)量屬性控制指標(biāo)提出相關(guān)的分析方法。這些方法經(jīng)過(guò)USP生物科學(xué)專(zhuān)家委員會(huì)的審查，將成為行業(yè)重要的參考指南和技術(shù)資源?，F(xiàn)今，為了進(jìn)一步完善和提高指南中的內(nèi)容，USP正在征集指南草案的反饋意見(jiàn)，有助于提高病毒載體類(lèi)疫苗產(chǎn)品質(zhì)量。意見(jiàn)征集將在2022年7月31日截止，屆時(shí)該草案方法將正式確認(rèn)。
草案中提到采用體積排阻色譜聯(lián)合多角度光散射檢測(cè)器（SEC-MALS）用于含量檢測(cè)項(xiàng)，具體實(shí)驗(yàn)方法如下：
磷酸緩沖溶液（2×PBS）：9.0 g氯化鈉，1.09 g磷酸氫二鈉，0.32 g 磷酸二氫鉀，于蒸餾水中溶解并稀釋至100 mL
溶液A：2×PBS+10%乙醇
樣品濃度：濃度范圍5×10^10~1×10^15 capsids/mL
檢測(cè)模式：液相色譜
檢測(cè)器：UV，260 nm及280 nm；MALS；DRI串聯(lián)
色譜柱：賽分科技 SRT SEC-1000，4.6 mm×300 mm
色譜柱溫度：25℃
樣品溫度：4℃
流速：0.35 mL/min
（原文件中為1.0 mL/min，由于該方法參考拜瑪琳制藥（BioMarin）發(fā)表文獻(xiàn)方法，經(jīng)與客戶(hù)確認(rèn)流速應(yīng)為0.35 mL/min，目前正在聯(lián)系USP進(jìn)行更正）
分析方法：分析時(shí)MALS和DRI信號(hào)必須歸一化，采用“球”模型計(jì)算平均摩爾質(zhì)量及其質(zhì)量分布，衣殼蛋白和包裹DNA的固有dn/dc值分別為0.185和0.170。
延展閱讀
賽分科技大孔徑色譜柱已廣泛應(yīng)用于腺相關(guān)病毒載體（AAV）的檢測(cè)。此前文獻(xiàn)速遞欄目中，賽分科技美國(guó)客戶(hù)BioMarin在自然雜志子刊《Scientific Reports》上發(fā)表文章，介紹了利用賽分科技SRT SEC-1000體積排阻柱有效分離AAV衣殼單體、聚體及聯(lián)用MALS測(cè)定AAV衣殼及載體基因組，使其成為基因治療工程中產(chǎn)品開(kāi)發(fā)和過(guò)程分析的重要工具。
賽分科技客戶(hù)賽諾菲在《Human Gene Therapy》上發(fā)表了文章，利用賽分科技SRT SEC-500開(kāi)發(fā)出雙波長(zhǎng)檢測(cè) (SEC-DW) AAV 樣品的完整殼百分比的方法，可作為參考方法。
賽分科技客戶(hù)REGENXBIO在《Journal of Pharmaceutical Sciences》雜志上發(fā)表的文章中提到SRT SEC-1000應(yīng)用于AAV中游離DNA和聚體的檢測(cè)。
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