引言
多藥聯(lián)合制劑，是指在單一劑型中融合了兩種及以上不同藥物成分的創(chuàng)新模式。與單一藥物制劑不同，多藥聯(lián)合制劑通過各藥物間的協(xié)同效應，在治療途徑中實現(xiàn)更高的療效。但與此同時，這種復合制劑也會導致藥物間異質(zhì)性相互作用，產(chǎn)生療效未知和免疫原性不確定的特殊雜質(zhì)，為藥物安全性和有效性帶來了新的挑戰(zhàn)。因此，探索并建立一套科學合理的評估體系，用以篩查由制劑引發(fā)的抗體異構體現(xiàn)象，顯得尤為關鍵。
為解決這一問題，2024年初，再生元公司采用賽分科技Zenix SEC-300色譜柱，開發(fā)出混合模式體積排阻色譜(MM-SEC)分析方法，在異二聚體與總二聚體(同型與異型混合)的分離純化中具有獨特優(yōu)勢。與其他分離模式相比，MM-SEC可以實現(xiàn)基線分離，異二聚體純度為67%，滿足分離純化要求(點擊文末閱讀原文查詢相關文章)。該方法在疫苗研發(fā)、藥物篩選評估等方面具有重大意義。
背景介紹
在生物制藥領域，再生元公司推出的卡西利維單抗和英德維單抗(Casirivimab＆imdevimab)作為典型的多藥聯(lián)合制劑藥物，可以通過結合病毒表面的三聚體刺突蛋白(S蛋白)，激活免疫系統(tǒng)，發(fā)揮至關重要的作用。這兩種抗體以1:1比例與IgG1抗體混合，形成了表位結合均衡的治療方案。
然而，多藥聯(lián)合制劑中產(chǎn)生的抗體異二聚體，其物理屬性與抗體藥物制品中原生存在的同源二聚體高度相似，這一特性為目標物質(zhì)的精準分離和純化帶來了巨大挑戰(zhàn)。賽分科技Zenix SEC-300色譜柱，其特有的表面修飾技術和優(yōu)異的分離性能，在保持高分辨率的同時可以實現(xiàn)異二聚體的基線分離和富集，確保最終產(chǎn)品滿足預期。
文章概述
對于多藥聯(lián)合制劑，其挑戰(zhàn)在于如何高效地從大量的單體和同源二聚體中提取出少量但至關重要的異二聚體。傳統(tǒng)的色譜分離模式各有優(yōu)勢，但單獨使用時可能無法達到理想的分離效果。因此，結合體積排阻色譜(Size Exclusion Chromatography, SEC)和疏水相互作用色譜(Hydrophobic Interaction Chromatography, HIC)技術特點的混合模式色譜(MM-SEC，后文簡稱MMC)應運而生，成為解決這一難題的理想方案。
研究人員通過采用賽分科技Zenix SEC色譜柱開發(fā)的MMC技術，有效實現(xiàn)了目標產(chǎn)品中異二聚體的分離與富集，為中和抗體治療方法的質(zhì)量控制提供了有力支持，開辟了新的分離純化途徑。
聚體富集
色譜柱：Zenix SEC-300(7.8×300mm,3μm,300Å)
流動相：20mM磷酸鈉，10mM醋酸鈉，300mM硫酸鈉，150mM氯化鈉
流速：0.25mL/min
紫外檢測波長：UV280nm和UV215nm
進樣量：10μg
整合色譜圖以確定每個峰的相對豐度，結果如下：
圖1.中和抗體二聚體SEC富集結果
圖1是將異源二聚體從痕量(＜0.05%)富集到＞55%純度的過程。如圖1所示，MMC模式下總二聚體樣品被分成4個特定的二聚體峰，根據(jù)不同疏水性，可實現(xiàn)基線分離。不同洗脫峰主要對應于casirivimab同源二聚體、imdevimab同源二聚體及位于兩者之間的異二聚體。經(jīng)SEC分離純化后，異二聚體的純度提高至約67%，顯示出MMC技術在抗體異二聚體富集上的顯著成效。
圖2.富集組分穩(wěn)定性數(shù)據(jù)
圖2是每個樣品第0和第14天的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)。富集的總二聚體和異二聚體在37℃下培育，并進行MMC-UPLC分析。數(shù)據(jù)表明，隨著時間的推移，富集的組分傾向于解離成相應的單體單抗。進一步研究表明，這部分主要是兩種單抗樣品的同型二聚體，異二聚體的穩(wěn)定性與單個藥物成分中的同型二聚體類似。
實驗結論
綜上所述，在高鹽條件下，Zenix色譜柱能夠從總二聚體中分離異源二聚體。該實驗為中和抗體治療方法的質(zhì)量控制提供了有力支持，不僅為進一步了解抗體間的相互作用和結構特性創(chuàng)造有利條件，也為整個生物制藥行業(yè)在復雜蛋白制品的純化和分析方面開辟了新的途徑。
產(chǎn)品介紹
賽分科技SEC系列色譜柱，采用特有的表面修飾技術，分離速度快，分辨率高，通用性好，批次重現(xiàn)性強，適用于質(zhì)控QC放行，也是分析型SEC值得信賴的產(chǎn)品。
圖3.賽分科技SEC固定相表面修飾工藝
“-C”系列產(chǎn)品，采用賽分科技獨有的固定相修飾工藝（見圖2），硅膠表面鍵合一層“平躺”的單分子層，最大程度減少非特異性相互作用。“-C”系列產(chǎn)品適用于疏水性較強的樣品，可以減少有機相的使用，安全、環(huán)保，讓您的實驗無后顧之憂。
延展閱讀
體積排阻色譜法適用于從小規(guī)模實驗室研究到大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)的廣泛需求。賽分科技SEC系列產(chǎn)品具有柱容量大、操作簡單、易于自動化的特點，能夠穩(wěn)定、連續(xù)地處理大量樣品，滿足治療性蛋白在疫苗研制、臨床試驗乃至商業(yè)化生產(chǎn)中的高通量需求。
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《色譜柱保養(yǎng)小貼士：SEC/IEX色譜柱清潔指南》
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